Sadržaj:

Kako birate klonove?
Kako birate klonove?

Video: Kako birate klonove?

Video: Kako birate klonove?
Video: Синдбад. Пираты семи штормов. Мультфильм 2024, Studeni
Anonim

Kada birajući a klon , budite sigurni da je korijenje snažno, bijelo i željno strši iz podloge za uzgoj. Ako je korijenje smeđe i smežurano ili se na neki drugi način čini neaktivnim, vratite ga i potražite bolji.

Osim toga, kako klonirati jednu stanicu?

  1. Izbrojite stanice kako biste stavili ~16 000 stanica u prvu jažicu (A1) ploče s 96 jažica koja sadrži 200 µL medija.
  2. Uklonite 100 µL iz stanica koje sadrže A1 i pomiješajte s B1, pipetiranjem gore-dolje 3x da se dobro promiješa prije uklanjanja 100 µL i miješanja s C1, itd.

Također, kako odabrati koloniju stanica sisavaca? Stavite ploču pod mikroskop kako biste odabrali nediferencirane zdrave kolonije . Birajte kolonije pomoću pipete P-20 postavljene na 10ul. Pažljivo odabrati a kolonija bez razbijanja kolonija u samac Stanice i premjestite ga u ploču s 96 jažica s tripsinom. Pipetirajte gore-dolje nekoliko puta kako biste raspršili kolonija.

Shodno tome, kako se koristi klonski cilindar?

Korištenje sterilne srednje pincete, pokupite a klonirajući cilindar . Nježno pritisnite ravno dno cilindar u glatku silikonsku mast i uklonite naglim okomitim pokretom. Ako se radi ispravno, to će dati ravnomjernu raspodjelu masti na dnu cilindar . Postavi cilindar preko kolonije.

Kako birate kolonije za stabilne stanične linije?

Protokol za generiranje stabilnih staničnih linija zahtijeva nekoliko koraka kao što je prikazano u nastavku:

  1. Generirajte krivulju ubijanja kako biste odredili optimalnu koncentraciju odabranog antibiotika.
  2. Transficirajte stanice željenim plazmidnim konstruktom(ima)
  3. Odaberite i proširite stabilne poliklonske kolonije.
  4. Identificirajte pojedinačne klonove ograničenim razrjeđivanjem i ekspanzijom.

Preporučeni: