Što se događa ako dodate previše restriktivnog enzima?
Što se događa ako dodate previše restriktivnog enzima?

Video: Što se događa ako dodate previše restriktivnog enzima?

Video: Što se događa ako dodate previše restriktivnog enzima?
Video: Что делать, если вы перестанете есть хлеб на 30 дней? 2024, Studeni
Anonim

Može doći do nepotpune probave kad previše ili isto malo enzim koristi se. The prisutnost kontaminanata u the DNK uzorak limenka inhibirati enzime , što također rezultira nepotpunom probavom. Neki restrikcijskim enzimima zahtijevaju kofaktore za punu aktivnost.

Osim toga, zašto se restrikcijski enzimi dodaju zadnji?

The restrikcijski enzim obično je posljednji komponenta dodano na reakciju kako bi se osiguralo da nije izloženo ekstremnim uvjetima. Sastavljenu reakciju treba pomiješati nakon enzim dodatak. Pomiješajte sve otopine koje sadrže restrikcijskim enzimima nježno izbjegavati enzim inaktivacija.

Nadalje, kako se može poboljšati probava restrikcijskih enzima? Ne koristite više od preporučenog enzim količinu (npr. 10 jedinica enzim po mikrogramu DNK). Smanjite količinu enzim u reakciji, ako je potrebno. Izbjegavajte dugotrajnu inkubaciju digestija reakcija. Koristite preporučeni pufer za reakciju.

Također znate, zašto se restrikcijski enzim ne bi smanjio?

Priprema DNK za cijepanje trebao bi ne sadrže zagađivače kao što su fenol, kloroform, alkohol, EDTA, deterdženti ili prekomjerne soli, što sve može ometati restrikcijski enzim aktivnost. Ako je prisutan inhibitor (često sol, EDTA ili fenol), kontrolna DNK će ne rezati nakon miješanja.

Zašto količina enzima može uzrokovati aktivnost zvijezda?

Zvjezdana aktivnost je opuštanje ili promjena specifičnosti ograničenja enzim posredovano cijepanje DNA koje limenka nastaju u reakcijskim uvjetima koji se značajno razlikuju od onih optimalnih za enzim . Zvjezdana aktivnost može dogoditi zbog prisutnosti Mg2+, kao je vidi se u HindIII, na primjer.

Preporučeni: