Možete li sekvencirati PCR proizvod?

2024 Autor: Stanley Ellington | [email protected]. Zadnja promjena: 2023-12-16 00:17

Direktno Sekvenciranje od PCR proizvodi . Sasvim je moguće izravno slijed a PCR proizvod bez prethodnog kloniranja fragmenta. Direktno PCR sekvenciranje rijetko je uspješan osim ako vas provesti neko vrijeme osiguravajući to vas ne upadaju u jedan od mnogih zamki.

Na ovaj način, što je sekvenciranje PCR?

Direktno Sekvenciranje od PCR Proizvodi. Morate ukloniti sve PCR početnice i neugrađeni nukleotidi prije nego što je proizvod sekvencijalno . Sekvenciranje koristi samo jedan temeljni premaz umjesto dva korištena u PCR . Ako ne uklonite oba primera, dobit ćete dva sekvence naložene jedna na drugu koja nisu čitljiva.

Isto tako, mogu li koristiti PCR primere za sekvenciranje? PCR prajmeri namijenjeni su za PCR amplifikacija kako bi se dobio amplikon. Prajmeri za sekvenciranje su korišteni do slijed fragment DNK i otkriti njegovu DNK slijed identificirati. 4. Dva PCR prajmeri potrebni su u a PCR reakcija (obično); samo jedan prajmer za sekvenciranje se dodaje u a sekvenciranje reakcija.

Imajući to u vidu, kako testirate PCR proizvode?

Detekcija i analiza PCR proizvodi . The proizvod od a PCR trebao bi biti fragment ili fragmenti DNK određene duljine. Za otkrivanje pojačanih sekvenci mogu se koristiti mnoge tehnike (vidi tablicu). Najjednostavnija i najčešće korištena tehnika je elektroforeza PCR proizvod na agaroznom gelu s EtBr (etidijev bromid).

Zašto je potrebno pročistiti PCR proizvode prije sekvenciranja?

Pročišćavanje DNK iz a PCR reakcija je tipično potrebno za daljnju upotrebu, te olakšava uklanjanje enzima, nukleotida, početnica i komponenti pufera.