Zašto je potrebno pročistiti PCR proizvode prije sekvenciranja?

2024 Autor: Stanley Ellington | [email protected]. Zadnja promjena: 2023-12-16 00:17

Provjera željenog proizvod je bitna , što uključuje potvrđivanje nedostatka nespecifičnih proizvodi i dimeri prajmera. Čist -up reakcijske smjese je također potrebno za uklanjanje neinkorporiranih početnica i dNTP-a koji mogu ometati naknadne reakcije i dovesti do nečitljive sekvence.

Osim toga, zašto je potrebno pročišćavati PCR proizvode?

Trebaš pročistiti PCR proizvode riješiti se neiskorištenih početnica, nukleotida i enzima kako bi se optimizirao uspjeh ligacije, koja će održavati i sekvencirati proizvod od PCR . Do pročistiti the PCR proizvodi , koristi se ekskluzijska kromatografija.

Netko se također može pitati, trebate li pročistiti PCR proizvode prije probave restrikcijske endonukleaze? Većina ograničenje enzimi su aktivni u PCR tamponima. Za aplikacije za kloniranje, pročišćavanje od PCR proizvodi prije probave je potrebno za uklanjanje aktivne termofilne DNA polimeraze prisutne u PCR smjesa. DNA polimeraze mogu promijeniti krajeve cijepane DNA i smanjiti prinos ligacije.

Ljudi također pitaju, kako pripremate PCR proizvode za sekvenciranje?

Izravno sekvenciranje PCR proizvoda

1. Uvjerite se da ste pojačali pravi fragment.
2. Morate ukloniti sve preostale PCR primere i neugrađene nukleotide.
3. Ako će PCR primeri biti i početnici za sekvenciranje, provjerite odgovaraju li našim uvjetima.
4. Nemojte previše koncentrirati uzorak!

Možete li sekvencirati PCR proizvod?

Direktno Sekvenciranje od PCR proizvodi . Sekvenciranje koristi samo jedan temeljni premaz umjesto dva korištena u PCR . Ako to uradiš ne uklanjati oba temeljna premaza, hoćeš dobiti dva sekvence naložene jedna na drugu koja nisu čitljiva. U redu je koristiti a PCR temeljni premaz za sekvenciranje sve dok to odgovara našim uvjetima.